Изучение антимикробной активности прополиса

Е.А. Данилина, Э.Г. Кравцов, Е.Ю. Бабаева

Кафедра управления и экономики фармации

Кафедра микробиологии и вирусологии

Кафедра ботаники, физиологии растений и агробиотехнологии

Российский университет дружбы народов

ул. Миклухо-Маклая, 8/2, Москва, Россия, 117198

 

Изучена антимикробная активность образцов прополиса из разных регионов с помощью нескольких методик. Показано, что только методика, изложенная в ГОСТ Р 53124-2008 «Прополис.

Антимикробная активность», дает корректный результат. Максимальная противомикробная активность выявлена в образце из Луганской области Украины. Установлено, что водорастворимая

часть водно-спиртового экстракта прополиса не обладает антимикробной активностью.

 

Ключевые слова: прополис, антимикробная активность.

Прополис — это продукт пчеловодства, представляющий собой смесь смо-

листых, фенольных веществ, терпеноидов, воска и других соединений природ-

ного происхождения. Благодаря широкому спектру биологической активности

соединений, входящих в состав прополиса, лекарственные препараты из него

используются современной медициной и ветеринарией [8]. Состав прополиса

сложен и полностью не изучен [5; 7]. При контроле качества прополиса исполь-

зуется ряд органолептических показателей (цвет, запах и др.), что не соответст-

вует современным требованиям.

По данным некоторых источников, прополис предлагается стандартизовать

по минимальной подавляющей концентрации его извлечений относительно микро-

организмов. На одни виды микробов прополис оказывает бактериостатический

эффект, на другие — бактерицидный. Например, минимальные бактерицидные

концентрации в отношении культур Staphylococcus aureus 209Р варьируют между

110 и 1680 мкг/мл. По-видимому, для гарантии наиболее широких антибиотических свойств прополиса, включающих бактерицидный и бактериостатический

эффекты, стандартизация должна быть одновременно основана на обоих показа-

телях антимикробного действия [9]. В РФ действует ГОСТ Р 53124-2008 «Про-

полис. Антимикробная активность». Он устанавливает метод определения ми-

нимальной подавляющей концентрации водно-спиртового экстракта прополиса

(в пересчете на сухую массу прополиса) в диапазоне от 100 до 600 мкг/мл для

характеристики его антимикробной активности в отношении Staphylococcus aureus

209Р (FDA 209Р, ATCC 6538P) [1].

 

Целью работы является изучение антимикробной активности образцов про-

полиса из разных регионов. Для достижения поставленной цели решались сле-

дующие задачи:

1) оценивали возможность использования метода дисков для определения

бактериостатической активности спирторастворимого и водорастворимого ком-

понентов прополиса;

2) оценивали корректность метода разведений при определении бактерио-

статического действия спиртового экстракта прополиса;

3) проводили стандартизацию образцов прополиса по бактериостатической

активности методом, регламентированным ГОСТ Р 53124-2008.

 

Материалы и методы.

Объектами исследования были образцы прополиса

из двух регионов РФ (Орловской и Московской (2 образца) областей), а также

из Черниговской и Луганской областей Украины. Для определения противомик-

робного действия опытных образцов был использован референс-штамм Staphylococcus

aureus 209Р из коллекции кафедры микробиологии и вирусологии РУДН.

Его культивировали на агаре Мюллера-Хинтона (МХА). Для проведения опытов

изначально из образцов прополиса готовили 5% водно-спиртовое извлечение,

для чего к 100 мл 70% этанола добавляли навеску 5 г измельченного образца,

выдерживали 2 дня при комнатной температуре и периодическом встряхивании,

фильтровали.

 

С целью получения из спиртового экстракта водорастворимого компонента

1 мл его высушивали, добавляли 1 мл воды, и затем в водном растворе опреде-

ляли концентрацию веществ по сухой массе. Наличие спиртового экстракта по-

служило основанием к привлечению разных способов оценки их бактериостатиче-

ской активности. В работе использовали метод дисков. С его помощью изучали

спиртовые экстракты и их водорастворимые компоненты.

Принимая во внимание то, что бактерицидным действием обладает экстра-

гент (70% этанол), перед использованием пропитанные изучаемым раствором

диски высушивали и только после этого наносили на засеянный газон.

В опытах с использованием метода разведений в ряд пробирок с жидким

мясопептонным бульоном (МПБ) с добавлением глюкозы до концентрации рас-

твора 2,5% вносили по 25 мкл спиртового экстракта прополиса в разных концент-

рациях. В качестве контроля в последнюю пробирку вносили 25 мкл 70% этанола.

 

Все пробирки засевали бактериологической петлей взвесью Staphylococcus aureus

209Р, содержащей стандартную концентрацию микробных клеток.

Третьим способом, примененным для определения бактериостатической

активности, был способ, регламентированный ГОСТ Р 53124-2008. Он заключа-

ется в том, что в расплавленную агаризованную среду, разлитую по 5 мл в ряд

пробирок, вносили разные концентрации раствора исследуемого образца. После

перемешивания среду выливали в чашки Петри, где она застывала. Чашки под-

сушивали 15 мин. и засевали газонной тест-культурой Staphylococcus aureus 209Р

в концентрации, оттестированной по стандарту мутности (10–4).

В таком варианте опыта удается исключить бактерицидное действие этанола.

В то же время, поскольку рост тест-культуры происходит на среде, содержащей

растворимые в этаноле компоненты образца, в случае их бактериостатического

действия можно зарегистрировать задержку роста культуры и определить дей-

ствующую концентрацию тестируемого образца.

 

Результаты и их обсуждение.  При определении бактерицидной активно-

сти образцов прополиса методом дисков было установлено, что вокруг дисков,

обработанных спиртовым экстрактом всех образцов, не образуются зоны задержки

роста Staphylococcus aureus 209Р. Это исключало бактериостатическую активность

тех компонентов, которые после высушивания дисков могли диффундировать

в гель, т.е. водорастворимых компонентов водно-спиртового экстракта, и в то же

время не исключало бактериостатическое действие спирторастворимых компо-

нентов, остающихся на дисках.

С целью уточнения данного заключения образцы прополиса исследовали

методом разведений. Оказалось, что при внесении в жидкую питательную среду

водно-спиртовых экстрактов образцов в разных разведениях рост тест-культуры

отсутствовал. При этом не было роста и в контроле, где вместо экстракта про-

полиса был внесен растворитель, что говорит о бактериостатической активности

самого растворителя (70% этанол), в связи с чем невозможно оценить эффек-

тивность прополиса.

Иной эффект наблюдался, когда в среду вносили водорастворимый компонент

водно-спиртового экстракта. Тест-культура давала рост во всех пробирках, в том

числе в контрольной. Это позволило считать, что водорастворимый компонент

не обладает бактериостатическим действием, даже в высоких его концентрациях

(600 мкг/мл).

Тем не менее, некоторые авторы не исключают бактериостатической актив-

ности водорастворимой субстанции прополиса, но только в том случае, когда

для ее получения применяют специальные методы, например, электролиз в вод-

ной среде [2—4].

Следует отметить, что подобная обработка прополиса приводит к его денату-

рации в результате гидролиза и окисления некоторых биологически активных

веществ.

 

Из всех использованных в данной работе методов способ определения про-

тивомикробной активности прополиса, предлагаемый действующим регламен-

том, оказался наиболее репрезентативным. Все исследуемые образцы вызывали

задержку роста культуры Staphylococcus aureus 209Р. Интенсивность задержки

коррелирует с концентрацией раствора анализируемого образца, т.е. в данной

постановке опыта можно было определить минимальную бактериостатическую

активность образца.

Во всех опытах контроль на бактериостатический эффект растворителя был

отрицательным. Это указывает на испарение этанола, который содержался в экс-

тракте образца при внесении в расплавленный агар. Были проведены испытания

пяти образцов прополиса. Они показали, что все образцы обладали бактериостати-

ческой активностью.

 

Заключение

В ходе исследования было выявлено, что все образцы прополиса обладают

антибактериальной активностью по отношению к золотистому стафилококку,

а их минимальная подавляющая концентрация составляет 109—208 мкг/мл, что

соответствует диапазону измерений, указанных в ГОСТ Р 53124-2008 (от 100

до 600 мкг/мл). Для определения антимикробной активности прополиса следует

использовать ГОСТ Р 53124-2008 «Прополис. Антимикробная активность». Бак-

териостатическая активность водорастворимого компонента спиртового экстракта

прополиса использованными методами не выявлена.

 

Ссылка на научную статью:

Данилина Екатерина Андреевна, Кравцов Эдуард Георгиевич, Бабаева Елена Юрьевна Изучение антимикробной активности прополиса // Вестник РУДН. Серия: Медицина. 2014. №4. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/izuchenie-antimikrobnoy-aktivnosti-propolisa

Share:

Поделиться в facebook
Facebook
Поделиться в twitter
Twitter
Поделиться в pinterest
Pinterest
Поделиться в linkedin
LinkedIn

Оставьте комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

On Key

Related Posts

Завод Tentorium Ruland в Перми

— единственный в мире перерабатывающий все продукты пчеловодства в промышленных масштабах. Для создания продукции мы используем натуральные, природные апикомпоненты. На Заводе перерабатывается полный спектр продуктов пчеловодства.

Реферальная ссылка Тенториум

ПРИВЕТСТВУЮ ВАС! Если вы живёте за пределами Беларуси, зарегистрироваться в Компанию Тенториум и получить дисконтную  карту, Вы можете по этой ссылке: https://tentorium.ru/registration/889012/  Нажав на неё,

Приветствую!

Оставьте свой номер и

я перезвоню Вам!